Real Time PCR vs PCR Convencional: Qual é a diferença?

Real Time PCR vs PCR Convencional

Quando falamos sobre diagnóstico molecular, duas técnicas de destaque são a PCR Convencional e a Real Time PCR (PCR em Tempo Real). Ambas são amplamente utilizadas na identificação de patógenos e no estudo de material genético, mas apresentam diferenças significativas em sua aplicação, precisão e tecnologia. Vamos explorar as principais distinções entre essas técnicas para entender qual delas se adequa melhor às suas necessidades.

O que é PCR Convencional?

A PCR Convencional é uma das técnicas pioneiras da biologia molecular, criada no final dos anos 80. Ela permite a amplificação de sequências específicas de DNA, gerando milhares de cópias para facilitar sua análise. Seu processo envolve três etapas principais:

  1. Desnaturação: Aquece-se o DNA a temperaturas elevadas (90º-100ºC) para separar as fitas da dupla-hélice.
  2. Anelamento: A temperatura é reduzida para que primers se liguem às regiões específicas do DNA molde.
  3. Extensão: A enzima DNA polimerase adiciona nucleotídeos, formando novas fitas de DNA.

Os produtos amplificados são visualizados em géis de agarose, utilizando corantes que intercalam com o DNA.

Limitações da PCR Convencional

Embora eficaz, a PCR Convencional possui algumas limitações:

  • Detecção qualitativa: Apenas indica a presença ou ausência de DNA alvo.
  • Demorada: A visualização dos resultados requer etapas adicionais, como eletroforese.
  • Menor sensibilidade: Pode apresentar dificuldades em identificar pequenas quantidades de DNA.

O que é Real Time PCR?

A Real Time PCR é uma evolução da técnica convencional. Ela combina a amplificação do DNA com a detecção simultânea dos produtos em tempo real, utilizando corantes fluorescentes ou sondas específicas.

Como funciona a Real Time PCR?

Durante a reação, os corantes emitem fluorescência conforme o DNA é amplificado. O equipamento monitoriza essa fluorescência, permitindo que os resultados sejam obtidos de forma rápida e precisa. As principais vantagens incluem:

  • Quantificação: Mede a quantidade exata de DNA presente na amostra.
  • Rapidez: Dispensa a eletroforese, entregando resultados imediatos.
  • Alta sensibilidade: Detecta quantidades mínimas de DNA.
  • Multiplex: Permite analisar múltiplas sequências em uma única reação.

Principais diferenças entre PCR Convencional e Real Time PCR

CaracterísticaPCR ConvencionalReal Time PCR
Visualização do resultadoGéis de agaroseDetecção fluorescente
Tempo para resultadoDemoradoRápido
SensibilidadeMenorMaior
QuantificaçãoNãoSim
CustoMais acessívelMais elevado

Qual escolher para diagnósticos veterinários?

A escolha entre as técnicas depende do objetivo do exame. A PCR Convencional é uma opção eficiente para detecção qualitativa de patógenos. Já a Real Time PCR é ideal quando é necessário:

  • Quantificar a carga genética de um patógeno.
  • Monitorar a progressão da infecção.
  • Obter resultados rápidos e precisos.

Real Time PCR vs PCR Convencional:

Embora a PCR Convencional continue sendo uma ferramenta útil e acessível, a Real Time PCR se destaca pela alta sensibilidade, rapidez e capacidade de quantificação. Essas vantagens tornam a técnica essencial para diagnósticos mais precisos e eficazes, especialmente na medicina veterinária. No Labmol Vet, utilizamos a tecnologia Real Time PCR para oferecer diagnósticos de excelência, garantindo confiança e qualidade nos resultados. Solicite seu exame!

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